- 产品详情
- 产品参数
品 名：重组蛋白A 琼脂糖凝聚FF,Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF
目录号：NRPB01L、NRPB01S(预装柱)
规 格：1 ml预装柱，5 ml预装柱
贮 存：20%乙醇，+2-8℃
运 输：2-25℃，常压、避光
保质期：3年
相关介绍：
蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，包含有5个区域，可以同IgG的Fc片段结合。作为一个亲和配基，蛋白A能够比较紧密地偶联到NUPharose上，使得这些区域可以同游离的IgG自由结合。一分子的蛋白A可以结合两分子的IgG。
技术指标：
基质 | 4%高度交联琼脂糖凝胶 |
配基 | 重组蛋白A |
配基密度 | ≥6 mg/ml |
填料粒径 | 60~180 μm |
**流速 | 800 cm/h |
推荐流速 | 20~100 cm/h |
pH稳定性 | pH 3~9 |
耐反压 | 0.3 MPa |
载量 | ≥40 mg/ml IgG |
抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：
种类 Species | 亚型 Antibody Class | 蛋白A Protein A | 蛋白G Protein G |
人 Human | IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab | +++ +++ + +++ + - + + | +++ +++ +++ +++ - - - + |
小鼠 Mouse | IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM | + +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - |
大鼠 Rat | IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c | + - - +++ | ++ +++ + +++ |
牛 Cow | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
山羊 Goat | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
马 Horse | IgG(ab) IgG(c) IgG(T) | + + - | - - +++ |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ |
猪Pig | IgG | +++ | + |
狗Dog | IgG | +++ | + |
鸡Chicken | IgY | - | - |
注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合。
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1) 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2) 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积；
3) 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
4) 用结合缓冲液再洗 5~10个柱床体积；
5) 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
6) 每次使用后用3~5个柱床体积的0.1 M 柠檬酸缓冲液（pH 3.0）再生清洗；
7) SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
图1
注意事项：
1) 预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2) 样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5%~20%、pH 7-9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
3) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
4) 通常（每次）目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸缓冲液（pH 2~3）洗3~5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。
5) 使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3个柱体积（10~30min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4~16h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。